n*8
2 楼
请问大侠，想裂解cultured cell，然后western blot detect一个核内的蛋白.
用的是RIPA buffer：
150 mM NaCl
1% NP40
0.5% of Sodium Deoxycholate
0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
50 mM Tris
请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
需不需要超声？
不甚感激！
用的是RIPA buffer：
150 mM NaCl
1% NP40
0.5% of Sodium Deoxycholate
0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
50 mM Tris
请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
需不需要超声？
不甚感激！
a*c
4 楼
能。
M*c
5 楼
往年大概都是什么水平的deal？（相比较平常他家的deal）
依稀记得是开户给121刀？不知道对不对@@
【在 r***e 的大作中提到】
: 前两年都有，今年怎么没看到啊？
依稀记得是开户给121刀？不知道对不对@@
【在 r***e 的大作中提到】
: 前两年都有，今年怎么没看到啊？
s*s
6 楼
做WB，又不是CoIP，这么扭捏干什么？统统2%SDS！
【在 n**8 的大作中提到】
: 请问大侠，想裂解cultured cell，然后western blot detect一个核内的蛋白.
: 用的是RIPA buffer：
: 150 mM NaCl
: 1% NP40
: 0.5% of Sodium Deoxycholate
: 0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
: 50 mM Tris
: 请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
: 需不需要超声？
: 不甚感激！
【在 n**8 的大作中提到】
: 请问大侠，想裂解cultured cell，然后western blot detect一个核内的蛋白.
: 用的是RIPA buffer：
: 150 mM NaCl
: 1% NP40
: 0.5% of Sodium Deoxycholate
: 0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
: 50 mM Tris
: 请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
: 需不需要超声？
: 不甚感激！
f*i
7 楼
前段时间版上有人说开ING账户不加透支保护的话没hard pull，是真的吗？
n*8
8 楼
多谢回复，
2%SDS 拿到的是lysate 不太好load啊。。
2%SDS 拿到的是lysate 不太好load啊。。
z*5
9 楼
co-ask
【在 f********i 的大作中提到】
: 前段时间版上有人说开ING账户不加透支保护的话没hard pull，是真的吗？
c*b
10 楼
你的loading dye dilute 之后就是2% SDS啊，loading 没关系的，5%的我都用过，
dilute到2%也能跑。
一般如果是DNA binding蛋白最好上2%SDS, 不然就RIPA+Benzonase (多麻烦啊）。
【在 n**8 的大作中提到】
: 多谢回复，
: 2%SDS 拿到的是lysate 不太好load啊。。
dilute到2%也能跑。
一般如果是DNA binding蛋白最好上2%SDS, 不然就RIPA+Benzonase (多麻烦啊）。
【在 n**8 的大作中提到】
: 多谢回复，
: 2%SDS 拿到的是lysate 不太好load啊。。
i*e
11 楼
今天关卡 明天再申请，算吗？
f*9
12 楼
用2%SDS之后，要不要超声打断DNA的？
好像不超声，有很多Genomic DNA出来，样品会很粘的，有没有什么好办法？
好像不超声，有很多Genomic DNA出来，样品会很粘的，有没有什么好办法？
l*g
13 楼
很难
【在 i*****e 的大作中提到】
: 今天关卡 明天再申请，算吗？
【在 i*****e 的大作中提到】
: 今天关卡 明天再申请，算吗？
n*8
14 楼
同意ffff6699。
我也曾很粗放的2%SDS，结果lysate就跟粘胶一样，不好load
我也曾很粗放的2%SDS，结果lysate就跟粘胶一样，不好load
l*g
15 楼
前年121，去年105
是checking
【在 M*****c 的大作中提到】
: 往年大概都是什么水平的deal？（相比较平常他家的deal）
: 依稀记得是开户给121刀？不知道对不对@@
是checking
【在 M*****c 的大作中提到】
: 往年大概都是什么水平的deal？（相比较平常他家的deal）
: 依稀记得是开户给121刀？不知道对不对@@
c*b
16 楼
我做的植物细胞，100度煮十分钟，然后14000 rpm 3分钟，还好，没什么DNA，不知道
animal cell会怎样。
【在 n**8 的大作中提到】
: 同意ffff6699。
: 我也曾很粗放的2%SDS，结果lysate就跟粘胶一样，不好load
animal cell会怎样。
【在 n**8 的大作中提到】
: 同意ffff6699。
: 我也曾很粗放的2%SDS，结果lysate就跟粘胶一样，不好load
d*e
17 楼
electric orange去年国庆是126
r*y
18 楼
no problem. Sonication is not needed if most of that protein are not bound
to chromatin. Spin 15 min at 14000 rpm, take the supernatant.
【在 n**8 的大作中提到】
: 请问大侠，想裂解cultured cell，然后western blot detect一个核内的蛋白.
: 用的是RIPA buffer：
: 150 mM NaCl
: 1% NP40
: 0.5% of Sodium Deoxycholate
: 0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
: 50 mM Tris
: 请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
: 需不需要超声？
: 不甚感激！
to chromatin. Spin 15 min at 14000 rpm, take the supernatant.
【在 n**8 的大作中提到】
: 请问大侠，想裂解cultured cell，然后western blot detect一个核内的蛋白.
: 用的是RIPA buffer：
: 150 mM NaCl
: 1% NP40
: 0.5% of Sodium Deoxycholate
: 0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
: 50 mM Tris
: 请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
: 需不需要超声？
: 不甚感激！
w*r
19 楼
no
【在 f********i 的大作中提到】
: 前段时间版上有人说开ING账户不加透支保护的话没hard pull，是真的吗？
【在 f********i 的大作中提到】
: 前段时间版上有人说开ING账户不加透支保护的话没hard pull，是真的吗？
s*r
20 楼
我是biorad的那个loading buffer,950ul+50ul beta-ME,然后用水1:1稀释。直接加到
孔里，一般12孔板一个孔100-250ul，晃一晃等2分钟，然后200ul的tip前面剪掉，刮一
刮收起来，煮沸上样。
孔里，一般12孔板一个孔100-250ul，晃一晃等2分钟，然后200ul的tip前面剪掉，刮一
刮收起来，煮沸上样。
b*i
21 楼
hard pull for new account
F*1
22 楼
我只拿了75，早知道晚开几天了。
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