L*i
2 楼
3x
n*m
3 楼
用的是Pfu，根据模板预测应该是670bp，结果中间有172bp的缺失。
V5
4 楼
【在 V5 的大作中提到】
: 反正我从来没有见过
x*0
5 楼
cancel it from menu items on printer icon when you right click it at right
bottom corner. But usually it is too late.
bottom corner. But usually it is too late.
Z*5
6 楼
丢失的是外显子？不同的剪切形式？
p*l
7 楼
Ask them, they should have copies of everything.
e*o
8 楼
先断打印机的电，后再按照楼上的干~~
d*y
9 楼
pfu有外切的作用，所以可能把你的引物切了吧，或者条件不对。把Tm 和 Mg 调整一下
。
。
s*2
10 楼
I have the original copy though
S*e
11 楼
我以前用pfu也碰到过同样的问题, 当时是扩4kb的片断，测了几个克隆，
其中一个克隆中间少了大约五六十个碱基, 很奇怪，也不知道是什么原因
其中一个克隆中间少了大约五六十个碱基, 很奇怪，也不知道是什么原因
s*e
12 楼
OPT card only should be OK, right?
o*r
13 楼
片段这么小，换Taq也应该没问题，而且可以知道是不是pfu的问题了。
【在 n******m 的大作中提到】
: 用的是Pfu，根据模板预测应该是670bp，结果中间有172bp的缺失。
【在 n******m 的大作中提到】
: 用的是Pfu，根据模板预测应该是670bp，结果中间有172bp的缺失。
a*x
14 楼
不要歪楼
【在 s********e 的大作中提到】
: OPT card only should be OK, right?
【在 s********e 的大作中提到】
: OPT card only should be OK, right?
n*m
15 楼
模板是质粒
【在 Z******5 的大作中提到】
: 丢失的是外显子？不同的剪切形式？
s*e
16 楼
Then why do you guys need its I-797?
n*m
17 楼
引物倒在，是中间缺了一段。
【在 d***y 的大作中提到】
: pfu有外切的作用，所以可能把你的引物切了吧，或者条件不对。把Tm 和 Mg 调整一下
: 。
a*x
18 楼
因为我们在讨论
【在 s********e 的大作中提到】
: Then why do you guys need its I-797?
【在 s********e 的大作中提到】
: Then why do you guys need its I-797?
n*m
19 楼
我总以为是自己出了错，看来不是。
【在 S******e 的大作中提到】
: 我以前用pfu也碰到过同样的问题, 当时是扩4kb的片断，测了几个克隆，
: 其中一个克隆中间少了大约五六十个碱基, 很奇怪，也不知道是什么原因
a*a
20 楼
肯定给你了，去翻垃圾箱。
s*s
21 楼
是不是有什么二级结构被skip了？看看序列？加点DMSO?
【在 n******m 的大作中提到】
:
: 我总以为是自己出了错，看来不是。
【在 n******m 的大作中提到】
:
: 我总以为是自己出了错，看来不是。
m*o
22 楼
找到知音了！我最近作很多PCR，用不同的酶，其中用clonetech家的GC2 polymerase的
时候少了一个exon，因为正好少的是一个exon，我就兴奋的以为发现了另外的剪切方式
，奶奶的，我都兴奋的通知老板了！后来一想不对劲，那个exon没了，会移码突变了。
后来我还是把它纯化了，想放到表达质粒去，因为量少，我就做了个nest pcr，用的
herculase 和GC2两个酶，结果呢，GC2又比herculase考出来的又小百把个bp，不问了
，我就放质粒去了，测出来呢，这回少了3个多exon，不过不是整个的exon了，所以我
就彻底断了继续下去的念头，还是老实的用原来的全序列了。这几天我正打算是不是跟
clonetech的客服联系，是不是可以给我点什么补偿呢？不过我确实觉得跟序列的二级
结构有关系，不知谁有这方面的文献。
时候少了一个exon，因为正好少的是一个exon，我就兴奋的以为发现了另外的剪切方式
，奶奶的，我都兴奋的通知老板了！后来一想不对劲，那个exon没了，会移码突变了。
后来我还是把它纯化了，想放到表达质粒去，因为量少，我就做了个nest pcr，用的
herculase 和GC2两个酶，结果呢，GC2又比herculase考出来的又小百把个bp，不问了
，我就放质粒去了，测出来呢，这回少了3个多exon，不过不是整个的exon了，所以我
就彻底断了继续下去的念头，还是老实的用原来的全序列了。这几天我正打算是不是跟
clonetech的客服联系，是不是可以给我点什么补偿呢？不过我确实觉得跟序列的二级
结构有关系，不知谁有这方面的文献。
s*f
23 楼
loop out？
还是别研究了，多试几个条件，赶紧move on吧。
【在 m***o 的大作中提到】
: 找到知音了！我最近作很多PCR，用不同的酶，其中用clonetech家的GC2 polymerase的
: 时候少了一个exon，因为正好少的是一个exon，我就兴奋的以为发现了另外的剪切方式
: ，奶奶的，我都兴奋的通知老板了！后来一想不对劲，那个exon没了，会移码突变了。
: 后来我还是把它纯化了，想放到表达质粒去，因为量少，我就做了个nest pcr，用的
: herculase 和GC2两个酶，结果呢，GC2又比herculase考出来的又小百把个bp，不问了
: ，我就放质粒去了，测出来呢，这回少了3个多exon，不过不是整个的exon了，所以我
: 就彻底断了继续下去的念头，还是老实的用原来的全序列了。这几天我正打算是不是跟
: clonetech的客服联系，是不是可以给我点什么补偿呢？不过我确实觉得跟序列的二级
: 结构有关系，不知谁有这方面的文献。
还是别研究了，多试几个条件，赶紧move on吧。
【在 m***o 的大作中提到】
: 找到知音了！我最近作很多PCR，用不同的酶，其中用clonetech家的GC2 polymerase的
: 时候少了一个exon，因为正好少的是一个exon，我就兴奋的以为发现了另外的剪切方式
: ，奶奶的，我都兴奋的通知老板了！后来一想不对劲，那个exon没了，会移码突变了。
: 后来我还是把它纯化了，想放到表达质粒去，因为量少，我就做了个nest pcr，用的
: herculase 和GC2两个酶，结果呢，GC2又比herculase考出来的又小百把个bp，不问了
: ，我就放质粒去了，测出来呢，这回少了3个多exon，不过不是整个的exon了，所以我
: 就彻底断了继续下去的念头，还是老实的用原来的全序列了。这几天我正打算是不是跟
: clonetech的客服联系，是不是可以给我点什么补偿呢？不过我确实觉得跟序列的二级
: 结构有关系，不知谁有这方面的文献。
i*l
24 楼
普通的 最便宜的 NEB Taq
不用高保真，就看他扩增的长度 跟PFU 的对比一下就知道了
【在 o*****r 的大作中提到】
: 片段这么小，换Taq也应该没问题，而且可以知道是不是pfu的问题了。
不用高保真，就看他扩增的长度 跟PFU 的对比一下就知道了
【在 o*****r 的大作中提到】
: 片段这么小，换Taq也应该没问题，而且可以知道是不是pfu的问题了。
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