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问个sequencing的初级问题

问个sequencing的初级问题# Biology - 生物学

s*n2011-07-14 07:07

1 楼

好像是罐头桃子包装上的方子，不过还蛮好吃的，也容易做
原料：
2杯中粉
1杯半firmly packed黄糖（我用了1杯不到点的糖，觉得差不多）
1条黄油，室温软化
1杯碎核桃仁儿
1个鸡蛋
1杯原味酸奶
1小勺盐
1小勺苏打粉
1小勺橙皮屑
30盎司的罐头桃子（peach slices）
做法：
混合面粉，糖和黄油，搓差不多均匀就可以了，混进果仁，然后把约2又1/3杯的混合物
倒进13*9的
烤盘（不要抹油）
剩下的混合物中加入鸡蛋，酸奶，盐，苏打粉和橙皮屑拌匀，然后均匀地抹在上面的那
个base上
均匀地摆上沥干的桃子片,350F烤40分钟，稍凉后切块食用。还可以加一块冰激凌或者
奶油一起吃，
哈哈
另外上一个前几天包的手工水饺，下锅前的。。。韭菜鲜虾猪肉的，特别鲜特别好吃！
推荐！

s*k2011-07-14 07:07

2 楼

http://www.erolstudios.com/singers-studio-voice-and-ear-trainin

E*z2011-07-14 07:07

3 楼

看到版面的人品贴，想来众多信男善女很是担心看走了眼，搭上WSN(V),就惨了。偶尔
读到了诸葛孔明的《识人性》，给你们参考。
夫知人之性,莫难察焉。美恶既殊，情貌不一。有温良而为诈者，有外恭而实欺者，有
尽力而不忠者。然知人之道有七焉，一曰间之以是非而观其志；二曰穷之以辞辩而观其变；三曰咨之以计谋而观其识：四曰告之以祸难而观其勇；五曰醉之以酒而观其性；六曰临之以利而观其廉；七曰期之以事而观信。

a*a2011-07-14 07:07

4 楼

好多人投条问。不想一一答复了，这里贴link
http://www.amazon.com/Smart-Cover-Partner-Slim-Fit-Apple/dp/B00
这是给2用的，3没问题。我试过了
这个套子唯一不好的地方是speaker那个区域是完全open的（就是整个一个打开的slot）
有的backcover那部分是grid或者小孔，所以保护更好）
其他没啥问题

g*82011-07-14 07:07

5 楼

既然可以用pcr product和primer直接做sequencing，那为什么有时还要用TOPO
cloning先clone，然后再做RCA，最后用RCA product 和primer来做sequencing呢？
多谢指教！

d*e2011-07-14 07:07

6 楼

###此帖已应当事人要求删除###

a*o2011-07-14 07:07

7 楼

再推荐一个练音准的哈！叫“学音符”：）

e*e2011-07-14 07:07

8 楼

zan

其变；三曰咨之以计谋而观其识：四曰告之以祸难而观其勇；五曰醉之以酒而观其性；
六曰临之以利而观其廉；七曰期之以事而观信。

【在 E***z 的大作中提到】

: 看到版面的人品贴，想来众多信男善女很是担心看走了眼，搭上WSN(V),就惨了。偶尔
: 读到了诸葛孔明的《识人性》，给你们参考。
: 夫知人之性,莫难察焉。美恶既殊，情貌不一。有温良而为诈者，有外恭而实欺者，有
: 尽力而不忠者。然知人之道有七焉，一曰间之以是非而观其志；二曰穷之以辞辩而观其变；三曰咨之以计谋而观其识：四曰告之以祸难而观其勇；五曰醉之以酒而观其性；六曰临之以利而观其廉；七曰期之以事而观信。

t*g2011-07-14 07:07

9 楼

顶一个今天刚order了

n*w2011-07-14 07:07

10 楼

PCR product is a heterogenous population which contains many copies of DNA.
Sequencing may give you false positive result. BTW, if you just send PCR
product and primers for sequencing, you cannot get full length (you will
lose ~60 at both ends.)
But after TOPO cloning, it only contains single copy of DNA.

s*n2011-07-14 07:07

11 楼

更正一下。。。薯条是我闺女。俺是薯条娘哈。。。
我就是懒。。。懒得照相，懒得贴菜谱。。。
今天正好有空，就多贴了几个，呵呵

【在 d**e 的大作中提到】

: ###此帖已应当事人要求删除###

z*n2011-07-14 07:07

12 楼

貌似不错，回头试试，谢推荐!

【在 s********k 的大作中提到】

: http://www.erolstudios.com/singers-studio-voice-and-ear-trainin

g*82011-07-14 07:07

13 楼

Thanks so much for your reply!
But if so, why most time we still do core sequencing (directly use pcr
product and primer to do sequencing)? Could you please tell me when should
we do core sequencing and when should we do TOPO cloning and then sequencing
?
Thanks again!

d*e2011-07-14 07:07

14 楼

###此帖已应当事人要求删除###

【在 s**n 的大作中提到】

: 更正一下。。。薯条是我闺女。俺是薯条娘哈。。。
: 我就是懒。。。懒得照相，懒得贴菜谱。。。
: 今天正好有空，就多贴了几个，呵呵

n*w2011-07-14 07:07

15 楼

Well, I am not an expert on this.
I think it depends on your goal.
Let's say, if I wanna express some protein, then I have to make sure that my
sequence is 100% right to avoid any mutation.
But if you just want to make sure you have a right thing after several round
of PCR, you can just roughly sequence the PCR product.
I hope more people can give input into this post.

should
sequencing

【在 g*******8 的大作中提到】

: Thanks so much for your reply!
: But if so, why most time we still do core sequencing (directly use pcr
: product and primer to do sequencing)? Could you please tell me when should
: we do core sequencing and when should we do TOPO cloning and then sequencing
: ?
: Thanks again!

s*n2011-07-14 07:07

16 楼

那也忒肉麻了。。。
别人要以为是小薯条娘咋办捏。。。

【在 d**e 的大作中提到】

: ###此帖已应当事人要求删除###

g*82011-07-14 07:07

17 楼

You do help me a lot! Thank you!

d*e2011-07-14 07:07

18 楼

###此帖已应当事人要求删除###

【在 s**n 的大作中提到】

: 那也忒肉麻了。。。
: 别人要以为是小薯条娘咋办捏。。。

G*y2011-07-14 07:07

19 楼

If you use the TOPO kit, it's ~10$ per reaction and ~a day and half's extra
time. It roughly doubles your cost and time for each sample. You have to
decide if it's worth the trouble/money based on your experiment.

should
sequencing

【在 g*******8 的大作中提到】

s*n2011-07-14 07:07

20 楼

我其实指的就是俺有个闺女。。。网名叫薯条。。。嘿嘿

【在 d**e 的大作中提到】

: ###此帖已应当事人要求删除###

R*92011-07-14 07:07

21 楼

主要取决于你的实验目的。举两个例子：
如果你想做克隆，用来表达蛋白，转基因什么的，当然要先克隆再测序了。因为PCR会
导入很多突变，你只有挑选正确的PCR序列才能进行下游的研究。
如果你用来genotyping,那么PCR产物用来测序比克隆要好，因为PCR是一个混合物，通
常对于一个位点，正确的远远大于变异的，那么当你测序的时候，那个变异的信号就被
覆盖了，只有真正的来自基因组/cDNA的变异（SNP或者突变）不会被覆盖，而且你很容
易通过测序结果看出杂合子来（双峰），要达到这些效果你要是测单克隆的质粒的话要
测好几个，费钱，费时，费力，估计没人会去做。

【在 g*******8 的大作中提到】

: 既然可以用pcr product和primer直接做sequencing，那为什么有时还要用TOPO
: cloning先clone，然后再做RCA，最后用RCA product 和primer来做sequencing呢？
: 多谢指教！

R*s2011-07-14 07:07

22 楼

very nice!

【在 s**n 的大作中提到】

: 好像是罐头桃子包装上的方子，不过还蛮好吃的，也容易做
: 原料：
: 2杯中粉
: 1杯半firmly packed黄糖（我用了1杯不到点的糖，觉得差不多）
: 1条黄油，室温软化
: 1杯碎核桃仁儿
: 1个鸡蛋
: 1杯原味酸奶
: 1小勺盐
: 1小勺苏打粉

F*t2011-07-14 07:07

23 楼

好吃~~

l*t2011-07-14 07:07

24 楼

Nice