transient 跟 stable expression 结果不一样。# Biology - 生物学
K*n
1 楼
周日改为20%降水概率，partly cloudy
大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
s*a
2 楼
看A对B表达的影响，western检测。
transient transfection，几乎没有影响。
stalbe clone，A明显诱导B的表达。
大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
谢谢！
transient transfection，几乎没有影响。
stalbe clone，A明显诱导B的表达。
大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
谢谢！
m*a
3 楼
周六下过雨周日山路会很难走吧
g*0
4 楼
哪种处理方法能得到老板想要的结果就按哪种处理方法。
c*n
5 楼
刚下过雨野花都被打辇了吧
e*7
6 楼
中！
【在 g********0 的大作中提到】
: 哪种处理方法能得到老板想要的结果就按哪种处理方法。
【在 g********0 的大作中提到】
: 哪种处理方法能得到老板想要的结果就按哪种处理方法。
M*e
7 楼
想去么？
【在 c*******n 的大作中提到】
: 刚下过雨野花都被打辇了吧
T*u
8 楼
maybe it is not direct regulation.
A->X->B
the time is too short for transient expression to see effect
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
A->X->B
the time is too short for transient expression to see effect
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
J*h
9 楼
咳咳， 俺暗自盘算3月底那个周末去antelope valley 看野罂粟。 差不多是最好的时
节了。那里有
个8迈左右的平地trail，多背些负重，也可以过瘾。那时visitor center也开了，在里
面适合老弱
病残，家庭踏青。
【在 K****n 的大作中提到】
: 周日改为20%降水概率，partly cloudy
: 大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
节了。那里有
个8迈左右的平地trail，多背些负重，也可以过瘾。那时visitor center也开了，在里
面适合老弱
病残，家庭踏青。
【在 K****n 的大作中提到】
: 周日改为20%降水概率，partly cloudy
: 大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
s*a
10 楼
这个说法有点意思，能展开说说么。
难道外源蛋白的表达必须得过段时间才能显出效应么？24小时或者48小时还不够么。
很多时候实验结果挺虐心的，重复几次有时候结果不一致，不知该怎么取舍。
【在 T****u 的大作中提到】
: maybe it is not direct regulation.
: A->X->B
: the time is too short for transient expression to see effect
难道外源蛋白的表达必须得过段时间才能显出效应么？24小时或者48小时还不够么。
很多时候实验结果挺虐心的，重复几次有时候结果不一致，不知该怎么取舍。
【在 T****u 的大作中提到】
: maybe it is not direct regulation.
: A->X->B
: the time is too short for transient expression to see effect
x*1
11 楼
我想去，什么时候啊
s*y
12 楼
换另外一种方法来确认。比方说体外转录。
至于transient 和stalbe 不一样这个，这个有几个常见的原因：
1。表达量不同，transient一般是大大过量，有时候导致细胞开始进入调亡所以掩盖了
你们想看到的表现。
2。stalbe clone有一个筛选进化的过程，可能会选出细胞毒性最小的表型，但是有可
能是伪像。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
至于transient 和stalbe 不一样这个，这个有几个常见的原因：
1。表达量不同，transient一般是大大过量，有时候导致细胞开始进入调亡所以掩盖了
你们想看到的表现。
2。stalbe clone有一个筛选进化的过程，可能会选出细胞毒性最小的表型，但是有可
能是伪像。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
v*s
13 楼
如果去的话，我报名
T*u
14 楼
depend on how important.
是不是值得follow
【在 s**********a 的大作中提到】
: 这个说法有点意思，能展开说说么。
: 难道外源蛋白的表达必须得过段时间才能显出效应么？24小时或者48小时还不够么。
: 很多时候实验结果挺虐心的，重复几次有时候结果不一致，不知该怎么取舍。
是不是值得follow
【在 s**********a 的大作中提到】
: 这个说法有点意思，能展开说说么。
: 难道外源蛋白的表达必须得过段时间才能显出效应么？24小时或者48小时还不够么。
: 很多时候实验结果挺虐心的，重复几次有时候结果不一致，不知该怎么取舍。
w*w
15 楼
这个好！！
热情娇艳的罂粟
【在 J******h 的大作中提到】
: 咳咳， 俺暗自盘算3月底那个周末去antelope valley 看野罂粟。 差不多是最好的时
: 节了。那里有
: 个8迈左右的平地trail，多背些负重，也可以过瘾。那时visitor center也开了，在里
: 面适合老弱
: 病残，家庭踏青。
热情娇艳的罂粟
【在 J******h 的大作中提到】
: 咳咳， 俺暗自盘算3月底那个周末去antelope valley 看野罂粟。 差不多是最好的时
: 节了。那里有
: 个8迈左右的平地trail，多背些负重，也可以过瘾。那时visitor center也开了，在里
: 面适合老弱
: 病残，家庭踏青。
q*g
16 楼
要不试试inducible stable expression.
a*9
17 楼
Wild flowers are everywhere if you are looking for them. My favorite trails
are La Jolla Canyon, Solstice Canyon, Santa Ynez Canyon, and Chamlee Park
. The outlook trail at Malibu State Park is not bad neither.
are La Jolla Canyon, Solstice Canyon, Santa Ynez Canyon, and Chamlee Park
. The outlook trail at Malibu State Park is not bad neither.
a*a
18 楼
挑了几个clone?
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
c*n
19 楼
想去啊
【在 M*********e 的大作中提到】
:
: 想去么？
【在 M*********e 的大作中提到】
:
: 想去么？
m*D
20 楼
你的stable结果是单一clone还是一个selection pool？因单一clone涉及genome里的插
入位点，一般是作两个不相关的clone,或者一个pool。这个在早期的transgenic mouse
试验里，法国的一个实验室作的老鼠有特别的现象，回追出插入位点导致一个重要基因
的knockout.
transient的结果有时是不可靠。上面有人提到的表达量是一个问题。
入位点，一般是作两个不相关的clone,或者一个pool。这个在早期的transgenic mouse
试验里，法国的一个实验室作的老鼠有特别的现象，回追出插入位点导致一个重要基因
的knockout.
transient的结果有时是不可靠。上面有人提到的表达量是一个问题。
x*i
21 楼
我也有点想去。。。
【在 c*******n 的大作中提到】
: 想去啊
m*5
22 楼
另外，这个也要看你做的是什么基因.
除了常见的比如clonal effect外 ，你所说的Stable Clone中上调，你的Control是什
么，是WT cell么？还是用empty vector从WT cell做出来的clone?
有一种可能是你所发现的基因上调和你的目的基因根本没关系，只是你clonal
selection过程中compensatary 的上调， Such like p53, ATF等protein都有可能这样
（还有无数别的可能）
所以主要看你做的pathway
最后，你做的是什么cell line?
如果是mES cell或者别的highly proliferative and self renewing 的cell line，
clonal effect要相对小.
如果是个Cancer cell line, 那么我觉得genome translocation导致的side effect可
能性非常大
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
除了常见的比如clonal effect外 ，你所说的Stable Clone中上调，你的Control是什
么，是WT cell么？还是用empty vector从WT cell做出来的clone?
有一种可能是你所发现的基因上调和你的目的基因根本没关系，只是你clonal
selection过程中compensatary 的上调， Such like p53, ATF等protein都有可能这样
（还有无数别的可能）
所以主要看你做的pathway
最后，你做的是什么cell line?
如果是mES cell或者别的highly proliferative and self renewing 的cell line，
clonal effect要相对小.
如果是个Cancer cell line, 那么我觉得genome translocation导致的side effect可
能性非常大
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
N*D
23 楼
周六吧
其实也不是到处都下雨，看去哪里了
【在 K****n 的大作中提到】
: 周日改为20%降水概率，partly cloudy
: 大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
其实也不是到处都下雨，看去哪里了
【在 K****n 的大作中提到】
: 周日改为20%降水概率，partly cloudy
: 大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
s*a
24 楼
谢谢，您说的很有道理。下面是western图
【在 s******y 的大作中提到】
: 换另外一种方法来确认。比方说体外转录。
: 至于transient 和stalbe 不一样这个，这个有几个常见的原因：
: 1。表达量不同，transient一般是大大过量，有时候导致细胞开始进入调亡所以掩盖了
: 你们想看到的表现。
: 2。stalbe clone有一个筛选进化的过程，可能会选出细胞毒性最小的表型，但是有可
: 能是伪像。
【在 s******y 的大作中提到】
: 换另外一种方法来确认。比方说体外转录。
: 至于transient 和stalbe 不一样这个，这个有几个常见的原因：
: 1。表达量不同，transient一般是大大过量，有时候导致细胞开始进入调亡所以掩盖了
: 你们想看到的表现。
: 2。stalbe clone有一个筛选进化的过程，可能会选出细胞毒性最小的表型，但是有可
: 能是伪像。
K*n
25 楼
我查了Malibu、Azusa和antelope valley/Lancaster这三个地区的分时天气预报，也就
是按小时为单位划分的那种。这场雨从周六清晨开始下，至少一直延续到周日早晨。周
日6am以后的分时预报还没出来，估计也不乐观，周日全天的降雨概率又变成了50%。再
考虑到现在气温仍低，野花可能没那么早盛开，所以我想最好选择等下周末再找机会。
目前的长期预报说下周末全部是晴天。
很抱歉这些天忽悠大家的胃口，没办法，这季节天气太多变，我也是被天气预报忽悠着
走，呵呵。。。不过也许比阴雨天开车跑了很长路程、找到野花却因为天气阴冷潮湿、
光照又不好，看不到最漂亮野花风景的结局好些吧
周日如果雨势不大，可以考虑就近找个trial去爬山，比如Echo Mountain或者Heninger
Flat那样的。但这就只能到周日早上看情况再做决定了。
祝大家周末快乐！ ：）
是按小时为单位划分的那种。这场雨从周六清晨开始下，至少一直延续到周日早晨。周
日6am以后的分时预报还没出来，估计也不乐观，周日全天的降雨概率又变成了50%。再
考虑到现在气温仍低，野花可能没那么早盛开，所以我想最好选择等下周末再找机会。
目前的长期预报说下周末全部是晴天。
很抱歉这些天忽悠大家的胃口，没办法，这季节天气太多变，我也是被天气预报忽悠着
走，呵呵。。。不过也许比阴雨天开车跑了很长路程、找到野花却因为天气阴冷潮湿、
光照又不好，看不到最漂亮野花风景的结局好些吧
周日如果雨势不大，可以考虑就近找个trial去爬山，比如Echo Mountain或者Heninger
Flat那样的。但这就只能到周日早上看情况再做决定了。
祝大家周末快乐！ ：）
s*a
26 楼
谢谢，我的是不同的单克隆。
mouse
【在 m*********D 的大作中提到】
: 你的stable结果是单一clone还是一个selection pool？因单一clone涉及genome里的插
: 入位点，一般是作两个不相关的clone,或者一个pool。这个在早期的transgenic mouse
: 试验里，法国的一个实验室作的老鼠有特别的现象，回追出插入位点导致一个重要基因
: 的knockout.
: transient的结果有时是不可靠。上面有人提到的表达量是一个问题。
mouse
【在 m*********D 的大作中提到】
: 你的stable结果是单一clone还是一个selection pool？因单一clone涉及genome里的插
: 入位点，一般是作两个不相关的clone,或者一个pool。这个在早期的transgenic mouse
: 试验里，法国的一个实验室作的老鼠有特别的现象，回追出插入位点导致一个重要基因
: 的knockout.
: transient的结果有时是不可靠。上面有人提到的表达量是一个问题。
K*n
27 楼
感谢你和Justin推荐的路线，我记下了。
我知道的还有解放区附近的Fish canyon和OC东南的Lake Elsino
待到天气好转，争取带大家把这些trail都转一遍
trails
Park
【在 a*******9 的大作中提到】
: Wild flowers are everywhere if you are looking for them. My favorite trails
: are La Jolla Canyon, Solstice Canyon, Santa Ynez Canyon, and Chamlee Park
: . The outlook trail at Malibu State Park is not bad neither.
我知道的还有解放区附近的Fish canyon和OC东南的Lake Elsino
待到天气好转，争取带大家把这些trail都转一遍
trails
Park
【在 a*******9 的大作中提到】
: Wild flowers are everywhere if you are looking for them. My favorite trails
: are La Jolla Canyon, Solstice Canyon, Santa Ynez Canyon, and Chamlee Park
: . The outlook trail at Malibu State Park is not bad neither.
s*a
28 楼
谢谢，我的细胞是cancer cell，control 也是stable control，请见图。
【在 m******5 的大作中提到】
: 另外，这个也要看你做的是什么基因.
: 除了常见的比如clonal effect外 ，你所说的Stable Clone中上调，你的Control是什
: 么，是WT cell么？还是用empty vector从WT cell做出来的clone?
: 有一种可能是你所发现的基因上调和你的目的基因根本没关系，只是你clonal
: selection过程中compensatary 的上调， Such like p53, ATF等protein都有可能这样
: （还有无数别的可能）
: 所以主要看你做的pathway
: 最后，你做的是什么cell line?
: 如果是mES cell或者别的highly proliferative and self renewing 的cell line，
: clonal effect要相对小.
【在 m******5 的大作中提到】
: 另外，这个也要看你做的是什么基因.
: 除了常见的比如clonal effect外 ，你所说的Stable Clone中上调，你的Control是什
: 么，是WT cell么？还是用empty vector从WT cell做出来的clone?
: 有一种可能是你所发现的基因上调和你的目的基因根本没关系，只是你clonal
: selection过程中compensatary 的上调， Such like p53, ATF等protein都有可能这样
: （还有无数别的可能）
: 所以主要看你做的pathway
: 最后，你做的是什么cell line?
: 如果是mES cell或者别的highly proliferative and self renewing 的cell line，
: clonal effect要相对小.
f*2
29 楼
现在就到野花的季节了吗？
【在 K****n 的大作中提到】
: 周日改为20%降水概率，partly cloudy
: 大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
【在 K****n 的大作中提到】
: 周日改为20%降水概率，partly cloudy
: 大家商量一下吧，貌似看野花的地方都不近，有人想去么？
b*2
30 楼
如果是类似于pcdna的系统的话，G418筛出来的克隆大部分是假的。我用荧光蛋白试过
。能有10%的真阳性就不错了
-阳
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
。能有10%的真阳性就不错了
-阳
【在 s**********a 的大作中提到】
: 看A对B表达的影响，western检测。
: transient transfection，几乎没有影响。
: stalbe clone，A明显诱导B的表达。
: 大家遇到过同样的问题么。对这种情况，是按有影响处理，还是没影响处理。
: 谢谢！
m*5
31 楼
从楼主给的Western结果上看upregulation很convincing.
不过楼主给的这么多subclone都表达楼主所要的基因么？
不过楼主给的这么多subclone都表达楼主所要的基因么？
b*H
32 楼
转染过程，尤其是那些试剂，对细胞是很强的STRESS.
楼主的问题在涉及细胞死亡的通路上尤其明显。很多被牛人牛杂志报道的蛋白（用转染
做的），说是很强的作用。。。。，作成STABLE CELL LINE, 超表达100倍以上，啥事
都没有，细胞欢的很。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 这个说法有点意思，能展开说说么。
: 难道外源蛋白的表达必须得过段时间才能显出效应么？24小时或者48小时还不够么。
: 很多时候实验结果挺虐心的，重复几次有时候结果不一致，不知该怎么取舍。
楼主的问题在涉及细胞死亡的通路上尤其明显。很多被牛人牛杂志报道的蛋白（用转染
做的），说是很强的作用。。。。，作成STABLE CELL LINE, 超表达100倍以上，啥事
都没有，细胞欢的很。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 这个说法有点意思，能展开说说么。
: 难道外源蛋白的表达必须得过段时间才能显出效应么？24小时或者48小时还不够么。
: 很多时候实验结果挺虐心的，重复几次有时候结果不一致，不知该怎么取舍。
s*a
33 楼
G４１８完后肯定要wetern蛋白验证的，而且我的克隆是从一个阳性细胞长起来的，所
以表达很稳定，而且表达量非常高。
另外，我用的是pCMV６表达载体。
【在 b***2 的大作中提到】
: 如果是类似于pcdna的系统的话，G418筛出来的克隆大部分是假的。我用荧光蛋白试过
: 。能有10%的真阳性就不错了
:
: -阳
以表达很稳定，而且表达量非常高。
另外，我用的是pCMV６表达载体。
【在 b***2 的大作中提到】
: 如果是类似于pcdna的系统的话，G418筛出来的克隆大部分是假的。我用荧光蛋白试过
: 。能有10%的真阳性就不错了
:
: -阳
s*a
34 楼
是的，至少在图中的６个克隆中，B都被A 诱导。
【在 m******5 的大作中提到】
: 从楼主给的Western结果上看upregulation很convincing.
: 不过楼主给的这么多subclone都表达楼主所要的基因么？
【在 m******5 的大作中提到】
: 从楼主给的Western结果上看upregulation很convincing.
: 不过楼主给的这么多subclone都表达楼主所要的基因么？
S*A
35 楼
transient实验后的蛋白量大吗？有的时候如果你的细胞的转染效率很低，或细胞死亡
的太多，你的结果也是没有什么差异的。要不你试试qPCR，有可能你的蛋白B被A诱导后
表达的时间很慢。
最省事的办法就是看老板的意思，哪个结果顺他的意思，就用哪个结果。哈哈，很多牛
人都这样的。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 谢谢，您说的很有道理。下面是western图
的太多，你的结果也是没有什么差异的。要不你试试qPCR，有可能你的蛋白B被A诱导后
表达的时间很慢。
最省事的办法就是看老板的意思，哪个结果顺他的意思，就用哪个结果。哈哈，很多牛
人都这样的。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 谢谢，您说的很有道理。下面是western图
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