s*s
2 楼
95%情况下，离线在server side都是瞬时的，难道网上所有
种子都有本地拷贝，太狠了
种子都有本地拷贝，太狠了
g*3
3 楼
不知道版上有没有人做过C26 conditioned medium 或者一般的conditioned medium，
主要是为了研究medium的细胞因子，生长因子。 比较了几个不同的protocol，有几个
不同点
1. RPMI Vs. DMEM, 有的protocol不推荐加抗生素，有的在收集CM前12小时换成no-
serum medium,有的一直在用regular full medium. 不知道血清里的生长因子细胞因子
会不会背景太强（用之前是heat inactivated过的）。
2. 如果为了鉴定一些特定因子x，我看有一些protocol用抗体在收集的培养基里加入x
的抗体。 和lab的人讨论过，他们说这种免疫中和的实验不是很好做。。。（也没说出
个所以然，只是说抗体的affinity可能很低balabala）。 然后有建议说用shRNA KO,
我试过c26 gfp 转染，感觉效率很低，当然lentiviral可能好很多。
第一回做这个protocol，希望有经验的大牛能够指点下。谢谢。
主要是为了研究medium的细胞因子，生长因子。 比较了几个不同的protocol，有几个
不同点
1. RPMI Vs. DMEM, 有的protocol不推荐加抗生素，有的在收集CM前12小时换成no-
serum medium,有的一直在用regular full medium. 不知道血清里的生长因子细胞因子
会不会背景太强（用之前是heat inactivated过的）。
2. 如果为了鉴定一些特定因子x，我看有一些protocol用抗体在收集的培养基里加入x
的抗体。 和lab的人讨论过，他们说这种免疫中和的实验不是很好做。。。（也没说出
个所以然，只是说抗体的affinity可能很低balabala）。 然后有建议说用shRNA KO,
我试过c26 gfp 转染，感觉效率很低，当然lentiviral可能好很多。
第一回做这个protocol，希望有经验的大牛能够指点下。谢谢。
D*G
4 楼
一个文件下载一遍以后就留在硬盘上， 以后再有同样请求就直接有了啊。查种子的
Hash码就知道。
一个文件过一段时间没人请求就删掉。
这样才是最省空间和带宽的。
【在 s******s 的大作中提到】
: 95%情况下，离线在server side都是瞬时的，难道网上所有
: 种子都有本地拷贝，太狠了
Hash码就知道。
一个文件过一段时间没人请求就删掉。
这样才是最省空间和带宽的。
【在 s******s 的大作中提到】
: 95%情况下，离线在server side都是瞬时的，难道网上所有
: 种子都有本地拷贝，太狠了
m*D
5 楼
每个试验都有它的目的，所以，考虑的因素也就完全不一样了。象我作CM,需要的是在
细胞很稀少的情况下，CM能帮助一个细胞变成一个colony,需要的就是细胞分泌的生长
因子。我不必搞清楚那些因子。所以，我就简单的用我需要的medium，在细胞数量比较
多的情况下收集。你要是想分析细胞分泌的生长因子等，你要考虑的是serum里带来的
因子会不会会干扰你的分析，serum里高浓度的BSA会不会让你的后续分析变得困难（我
现在也面临这个问题，正在试无serum的medium）。
如果你的目的是分析细胞分泌的生长因子等，我的建议就是细胞平时用的base medium
。要细胞adopt到新的base medium往往很不容易的，有时候需要几个pass。我会在收集
的那一步，不加serum，减少BSA和serum里带来的因子。所以，我会normally split细
胞，等细胞长到50-70%的confluence,先用1X PBS把细胞洗两篇，就加base medium,在
12小时内收集medium。
细胞很稀少的情况下，CM能帮助一个细胞变成一个colony,需要的就是细胞分泌的生长
因子。我不必搞清楚那些因子。所以，我就简单的用我需要的medium，在细胞数量比较
多的情况下收集。你要是想分析细胞分泌的生长因子等，你要考虑的是serum里带来的
因子会不会会干扰你的分析，serum里高浓度的BSA会不会让你的后续分析变得困难（我
现在也面临这个问题，正在试无serum的medium）。
如果你的目的是分析细胞分泌的生长因子等，我的建议就是细胞平时用的base medium
。要细胞adopt到新的base medium往往很不容易的，有时候需要几个pass。我会在收集
的那一步，不加serum，减少BSA和serum里带来的因子。所以，我会normally split细
胞，等细胞长到50-70%的confluence,先用1X PBS把细胞洗两篇，就加base medium,在
12小时内收集medium。
t*y
6 楼
很多资源直接就有，如果没版权限制，早就可以开放下载了，搞个什么离线下载其实就
是掩人耳目曲线救国。
是掩人耳目曲线救国。
g*3
7 楼
谢谢midwestpstd。 嗯，我们讨论过后也比较倾向于用base medium。
尝试查了serum里的各种因子成分，不过没有找到table。
谢谢。
medium
【在 m*********D 的大作中提到】
: 每个试验都有它的目的，所以，考虑的因素也就完全不一样了。象我作CM,需要的是在
: 细胞很稀少的情况下，CM能帮助一个细胞变成一个colony,需要的就是细胞分泌的生长
: 因子。我不必搞清楚那些因子。所以，我就简单的用我需要的medium，在细胞数量比较
: 多的情况下收集。你要是想分析细胞分泌的生长因子等，你要考虑的是serum里带来的
: 因子会不会会干扰你的分析，serum里高浓度的BSA会不会让你的后续分析变得困难（我
: 现在也面临这个问题，正在试无serum的medium）。
: 如果你的目的是分析细胞分泌的生长因子等，我的建议就是细胞平时用的base medium
: 。要细胞adopt到新的base medium往往很不容易的，有时候需要几个pass。我会在收集
: 的那一步，不加serum，减少BSA和serum里带来的因子。所以，我会normally split细
: 胞，等细胞长到50-70%的confluence,先用1X PBS把细胞洗两篇，就加base medium,在
尝试查了serum里的各种因子成分，不过没有找到table。
谢谢。
medium
【在 m*********D 的大作中提到】
: 每个试验都有它的目的，所以，考虑的因素也就完全不一样了。象我作CM,需要的是在
: 细胞很稀少的情况下，CM能帮助一个细胞变成一个colony,需要的就是细胞分泌的生长
: 因子。我不必搞清楚那些因子。所以，我就简单的用我需要的medium，在细胞数量比较
: 多的情况下收集。你要是想分析细胞分泌的生长因子等，你要考虑的是serum里带来的
: 因子会不会会干扰你的分析，serum里高浓度的BSA会不会让你的后续分析变得困难（我
: 现在也面临这个问题，正在试无serum的medium）。
: 如果你的目的是分析细胞分泌的生长因子等，我的建议就是细胞平时用的base medium
: 。要细胞adopt到新的base medium往往很不容易的，有时候需要几个pass。我会在收集
: 的那一步，不加serum，减少BSA和serum里带来的因子。所以，我会normally split细
: 胞，等细胞长到50-70%的confluence,先用1X PBS把细胞洗两篇，就加base medium,在
D*G
8 楼
下的就是刚出bluray的新片 要下老片谁费劲搞xunlei啊
【在 t*******y 的大作中提到】
: 很多资源直接就有，如果没版权限制，早就可以开放下载了，搞个什么离线下载其实就
: 是掩人耳目曲线救国。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 很多资源直接就有，如果没版权限制，早就可以开放下载了，搞个什么离线下载其实就
: 是掩人耳目曲线救国。
t*y
9 楼
这些显然迅雷收得最积极了，NewsGroup一出它就先下了。
【在 D*G 的大作中提到】
: 下的就是刚出bluray的新片 要下老片谁费劲搞xunlei啊
【在 D*G 的大作中提到】
: 下的就是刚出bluray的新片 要下老片谁费劲搞xunlei啊
G*h
10 楼
迅雷好多新片子没有
不如快播和一些小论坛
【在 t*******y 的大作中提到】
: 这些显然迅雷收得最积极了，NewsGroup一出它就先下了。
不如快播和一些小论坛
【在 t*******y 的大作中提到】
: 这些显然迅雷收得最积极了，NewsGroup一出它就先下了。
h*i
11 楼
迅雷都上了美国的恶市场名单了，牛！
【在 G*****h 的大作中提到】
: 迅雷好多新片子没有
: 不如快播和一些小论坛
【在 G*****h 的大作中提到】
: 迅雷好多新片子没有
: 不如快播和一些小论坛
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