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绝了!CCK-8/PI染色/transwell等细胞表型检测套路,全部整理好了......(速领)

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细胞表型是涉及基因和蛋白表达的多个细胞过程的集合体,这些过程导致细胞特定的形态和功能。


表型的最大特点就是可以通过特定的实验手段进行检测。而且检测表型的实验手段会随着研究层次的变化而变化。


那什么是研究的层次?在生物医学领域内,所谓的研究层次,就是不同的生物学结构和尺度。从宏观到微观,研究层次可以分为:人群→动物→组织→细胞→分子。
简单一点理解研究层次,大致等同于研究样本的来源。研究样本来源于细胞,就是细胞层次,研究样本来源于动物,就是动物层次。
而且需要明确一点,研究层次与层次之间,不是相互排斥而是可以“向下包容”的。所谓向下包容,指的是宏观的研究层次,可以包含微观的研究层次中的研究内容。
举例来讲,组织层面的研究,本质上就是样本来源于组织,研究的却是细胞的形态,以及分子 marker 的表达高低。
所以组织层面的研究,样本虽然来源于组织,但是研究的内容却依然聚焦于细胞和分子层面,所以我们说组织层面的研究是向下包容细胞研究和分子研究的。
近期,解螺旋整理出一份表型检测资源包,拿来分享给大家!希望对大家有帮助!
表型检测资源包包含细胞增殖检测方法(CCK-8、BrdU、平板克隆)、细胞凋亡检测实验(Hoechst染色、PI染色、TUNEL染色、Annexin V-PI染色)、细胞迁移黏附侵袭实验(细胞划痕实验、transwell实验、细胞粘附实验)、染色质构象检测方法(电镜、3C)以及多篇经典文献解读


目录↓↓↓


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1

细胞增值

在科研中,小伙伴们经常需要检测细胞增殖情况,比如敲掉某个与细胞生长有关的基因以后,细胞是挂了还是增加了?又比如,要验证一种抗肿瘤药物的药效,怎么知道细胞存活量?

解螺旋为大家整理了几个常用的细胞增殖检测方法,手把手教你!

1
CCK-8


检测细胞增殖的常用方法是CCK-8实验,英文全称是Cell Counting Kit-8,CCK-8试剂盒可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。





2
BrdU掺入法

BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中,而且这种置换可以稳定存在,并带到子代细胞中。此法比较常用,用于区分正在增殖的细胞与静止期细胞。





3
平板克隆

平板克隆形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞,适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。




2

细胞凋亡
在实验室摸爬滚打这么多年,大家都知道细胞身娇体弱难培养,一言不合就死给你看。解螺旋总结了几种常见的细胞凋亡检测方法,希望能够帮到你!

1
PI染色
PI是一种插入性核酸荧光染料,能选择性地嵌入核酸DNA双链螺旋的碱基之间并发出荧光。





2
Hoechst染色
Hoechst是一种蓝色荧光染料。有3种类似物,分别是Hoechst 33258,Hoechst 33342和Hoechst 34580。
其中Hoechst 33258和Hoechst 33342最常用,两者具有相同的激发光谱和发射光谱范围 。Hoechst能与DNA双螺旋的小沟结合,尤其是富含AT的序列。





3
TUNEL染色
TUNEL染色可检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是标记(荧光或者生物素)的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,再通过荧光激发或者化学显色的方法,特异准确地检测发生凋亡的细胞,而正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。





4
Annexin V-PI染色

Annexin V(Ca+依赖的磷脂结合蛋白)经常与搭档PI(碘化丙啶)染料共同捕获凋亡细胞,只要他俩一出手,总能将凋亡早晚期细胞和死细胞区分开来。






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细胞迁移、黏附、侵袭

细胞迁移、黏附、侵袭对于发育、免疫防御和伤口愈合等多种生理过程至关重要,它也是肿瘤恶性进展的标志。


解螺旋为大家带来详细的细胞迁移、黏附、侵袭实验,希望能为大家构思课题带来有益的启发。


1
细胞划痕实验
细胞划痕实验的原理是,将细胞培养在培养皿或培养板上,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上用枪头或硬物画一条线,使这条线上的细胞被机械力去除掉,人为制造一个空白区域,称为“划痕”。
然后继续培养细胞, 观察细胞向无细胞的划痕区域迁移的情况,来判断细胞的迁移能力。




2
transwell实验



Tranwell 迁移和侵袭实验就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开, 细胞放在低营养的培养液里,为了找吃的,细胞会往高营养的培养液里面跑,但是有膜挡着,所以要穿过膜才行。
我们在膜的上表面涂上一层基质胶,模仿细胞外基质,于是细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面,最后我们检测膜的下表面或高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了。





3
细胞黏附实验



细胞黏附实验需要使用细胞外基质的组分包被 96 孔板,不同的包被组分可能导致不同的实验结果,需要预实验确认。





4

染色质构象


在真核细胞中,DNA序列以染色质为载体,高度凝缩并存储于细胞核内,其复制、修复和转录表达等过程受到染色质构象的精准调控。


越来越多的研究表明,特定的染色质构象可选择性激活或沉默基因,从而控制细胞自我维持或定向分化,决定细胞的组织特异性和细胞命运。


因此,对染色质构象的深入研究已成为准确解析基因功能的一个关键切入点,也是当前基因组学研究所面临的一个巨大挑战。


解螺旋为大家详细讲解电镜检测、3C两大染色质检测技术,为大家的研究提供思路和参考。


1
电镜检测


透射电子显微镜是以图像方式提供样品的检测结果,其成像的决定因素是样品对入射电子的散射,包括弹性散射和非弹性散射两个过程。





2
3C
3C技术主要通过将细胞内的染色质行固定,然后使用能够识别6个碱基的限制性内切酶比如BglII,HindIII,EcoRI或者识别4个碱基的AciI,DpnII进行酶切,酶切之后再进行连接。





5

读文献学实验

科研人不能一味埋头做实验,多读文献也很重要,不要错过我们研究课题的相关前沿进展,涉及的实验设计及数据分析方法要反复琢磨,经典方法学文献一定要多加关注。


解螺旋为大家精选了几篇不可错过的文献,通过精读文献教大家怎么读文献中的实验方法部分。



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自从get猫大老师这份细胞实验宝典,我终于有底气拒绝师姐的“压榨”,跟着猫大老师的步骤一步一步来,实验做起来得心应手,试剂也是猫大老师亲自测试过的,从没出过错!实验小白也不用担心学不会,快扫码领取吧~


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