电转百科指南：如何提高电转染效率？技术专家总结以下八点！

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转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。《分子克隆实验指南》将转染（Transfection）定义为：“将外源基因导入哺乳动物细胞的一系列技术的统称”，实践中细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA、蛋白等生物活性分子导入真核细胞的技术。

按照原理来分类，细胞转染的方式可以分为3类：化学法、物理法和生物介导方法。电转染作为具有代表性的物理方法转染，出现于1982年，作为通用、易用的细胞转染方法，具有其他方法无法比拟的优势，如重复性好、适用范围广等特点，在一定条件下兼得电转效率和细胞活率，尤其对目前对原代细胞和一般认为难转染的细胞有较好的转染效率。

各转染方法优缺点整理，参考文献：Kim, T.K., Eberwine, J.H. Mammalian cell transfection: the present and the future. Anal Bioanal Chem 397, 3173–3178 (2010). https://doi.org/10.1007/s00216-010-3821-6

那么选择电转方法后，该如何提高电转染效率呢？Lonza电转技术专家为大家总结了以下八点：

1. 准备好加了新鲜培养基的多孔板，并在实验前于37°C下预平衡

2. 使用传代次数少并具有推荐融合度或密度（对数生长期）的细胞

3. 针对于贴壁细胞，需限制胰蛋白酶暴露时间，仔细监测细胞分离情况

4. 根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数；所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加，所用细胞过多可能导致细胞电转效率降低

5. 采用高质量DNA，使用内毒素去除试剂盒进行纯化；请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度

6. 室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心

7. 离心后加入Nucleofector™溶液，混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液，避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头重复抽吸

8. Nucleofection™核转后，用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基

• 轻轻将一次性移液管吸头置于电转耗材底部，收集细胞

• 将细胞悬液轻轻接种至制备的多孔板中

• 请勿重复吹吸混合细胞