请教关于doxycyline-inducible system在in vivo# Biology - 生物学M*C2012-09-01 07:091 楼就要下offer了,可是刚注意到车库的地面上有一条长裂缝,最宽的地方裂缝大概有半厘米。不知道这样是不是个大问题?会不会说明房子内部的地板下也有裂缝呢?请有经验的大侠帮忙。多谢了!
m*d2012-09-01 07:092 楼用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系,稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。在in vitro测试phenotype很稳定现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内,等tumor长起来,再开始给doxycycline以及相应的treatment。现在的问题是,doxy该怎么给,文献上很多都用doxycyclinedrinking water,可我听说doxycycline可能会precipitate,很难控制老鼠喝进去的量;还有人用doxycycline的食物,但似乎也不大好控制doxy的量。不知是否有人用过oral gavage,似乎这样可以准确地定量doxy,隔天通过gavage给doxy不知是否可行?请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统,它的doxy-inducible knockdownefficiency和leakiness不知道还不好谢谢
i*n2012-09-01 07:094 楼我以前用dox-containing water,浓度没那么高,不会沉淀。(水里加点糖,老鼠可能不喜欢喝dox水)现在我们把dox做到food里面。灌胃对小鼠伤害太大。doxycycline【在 m**********d 的大作中提到】: 用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系,稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。: 在in vitro测试phenotype很稳定: 现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内,等tumor长起来,再开始给doxycycline: 以及相应的treatment。现在的问题是,doxy该怎么给,文献上很多都用doxycycline: drinking water,可我听说doxycycline可能会precipitate,很难控制老鼠喝进去的量: ;还有人用doxycycline的食物,但似乎也不大好控制doxy的量。: 不知是否有人用过oral gavage,似乎这样可以准确地定量doxy,隔天通过gavage给: doxy不知是否可行?: 请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统,它的doxy-inducible knockdown: efficiency和leakiness不知道还不好
M*C2012-09-01 07:095 楼车库下面没有地下室。那这是不是说房子里面的地板下也有可能泥土下沉?会是说地基有问题吗?完全没概念。【在 t***3 的大作中提到】: 绝大多数车库下面不是地下室吧?由车库水泥地板下面的泥土下沉造成的。
z*t2012-09-01 07:096 楼我也用的是pTRIPZ,In-vivo用的是水加Dox。配方如下:0.5gDox溶于23mL 50% 蔗糖溶液中,注入230mL(8OZ)袋装水中。终浓度:Dox,2mg/mL,蔗糖,5%。水上盖锡箔纸避光,一周一换。用qPCR可以检测到RFP表达,说明此浓度可用。试过注射和灌胃。灌胃伤害太大,腹腔注射好像导致了腹水,原因不明。也试过食物(找别人借的),老鼠不太爱吃,不过效果不错,也可以诱导RFP表达,只是太贵,好像一买就是一个大包装,我用不了那么多,后来就一直用水了。
t*32012-09-01 07:097 楼建地下室的地基会比较花功夫,比如打桩,灌水泥,铺石子,装排水管。房子的重量压在地下室上。如果地下室地面没有下沉,地下室地面和墙没有大的裂缝,就没啥大问题。车库的水泥地下面也铺有石子,但一般功夫没有地下室地基做的足。有点裂缝用水泥补一下就可以了。下沉很严重的话就得把水泥地掀开重新垫底。光是车库水泥地裂缝不代表房子下沉。
M*C2012-09-01 07:099 楼我们这儿的房子没有地下室,车库是直接连着房子的,所以看到大裂缝有点儿怕怕,不知道还该不该买这个房子。题。【在 t***3 的大作中提到】: 建地下室的地基会比较花功夫,比如打桩,灌水泥,铺石子,装排水管。房子的重量压: 在地下室上。如果地下室地面没有下沉,地下室地面和墙没有大的裂缝,就没啥大问题。: 车库的水泥地下面也铺有石子,但一般功夫没有地下室地基做的足。有点裂缝用水泥补: 一下就可以了。下沉很严重的话就得把水泥地掀开重新垫底。光是车库水泥地: 裂缝不代表房子下沉。
m*d2012-09-01 07:0910 楼多谢楼上几位的热心回复!我所用的细胞已经带有一个puromycin resistant的luciferase construct了,因此在病毒infection之后没有办法再用puromycin筛选,幸好pTRIPZ vector有RFP,我用FASCsorting拿到的细胞pool【在 b**********8 的大作中提到】: 楼主,请问你用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系是怎么操作的?: 细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆?还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞?
t*32012-09-01 07:0911 楼没地下室啊,那一定请inspector仔细看看房子地基。不然不放心。不知道还该不该买这个房子。【在 M**C 的大作中提到】: 我们这儿的房子没有地下室,车库是直接连着房子的,所以看到大裂缝有点儿怕怕,不: 知道还该不该买这个房子。: : 题。