免疫组化化学染色实验成功的秘诀，大师兄直接拿它发了6分SCI！

众所周知，基础科研离不开实验操作，而我们科研小白总是在实验实操中手忙脚乱，不知道如何避免操作失误，也不知道咋解决在实验中遇到疑难杂症，辛辛苦苦重复了好多次的实验，总是折在某个环节……

其实，实验操作并没有想象中那么难，难就难在我们没有真正掌握实验原理，没有把握住实验过程中需要注意的细节。

比如：

在RT-PCR 实验中，RT试剂盒从冰箱拿出，应该充分解冻，瞬离后，混匀，放于冰上，可在冰上加样。试剂可以用数字贴纸编号，避免漏加、错加试剂。

在RNA 抽提实验中，要避免外源酶的污染，外源酶会造成 RNA 的降解，造成 RNA 得率太低，或者彻底失败，而外源酶又是无处不在的。

在Western blot 实验中，配胶时，建议先加水，再加Tris-HCL缓冲液，并且每加一种液体就混匀胶液。加入的TEMED有毒，务必在通风橱中操作，并且加入后立即混匀、灌胶。

……

实验中需要注意的细节很多，一着不慎满盘皆输。为了帮助大家解决实验过程中面临的重重难题，解螺旋整理了这份《酸谈实验资料包》，包含40+基础实验、8+热门实验详细教程，更有文献场景还原，猫大亲测试剂种草，全方位帮你填平实验的坑。

除了详细的实验课件，我们还专门配套了实验笔记和补充资料，方便大家更好地学习消化。

更重要的是，解螺旋高级讲师猫大老师将用自己的实战经验为你铺路，从讲原理到秀实操，从试剂推荐到疑难杂症的解析，手把手教大家实战技能。

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1.DNA 甲基化芯片

高通量甲基化芯片 Infinium Human Methylation 450K BeadChip 能够对人全基因组45万个甲基化位点进行检测，覆盖了上一代 27K 甲基化芯片 90%的位点，并同时增加了 CpG 岛以外的 CpG 位点、人类干细胞非 CpG 甲基化位点、正常组织与肿瘤（多种癌症）组织差异甲基化位点、编码区以外的 CpG 岛、miRNA 启动子区域和已通过 GWAS 的疾病相关区域的位点。

2.第二代 DNA 测序技术 

Illumina/Solexa Genome Analyzer 测序的基本原理是边合成边测序。在 Sanger 等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的 dNTP，当 DNA 聚合酶合成互补链时，每添加一种 dNTP 就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测 DNA 的序列信息。

3.基因芯片

基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法。

4.高通量检测

高通量检测技术可以一次检测多个样品中成千上万个基因的变化，根据高通量技术的不同，可以检测不同的变化，不仅可以检测 DNA、RNA、蛋白的丰度，还可以检测修饰程度，如蛋白磷酸化，DNA 甲基化等等。

5.circRNA 实验

从组织或细胞中提取的 total RNA 中，通常含有多种 RNA，circRNA 实验首先要去除样 本中的核糖体 RNA 和 poly-A RNA 干扰，并用 RNase 酶消化掉线性 RNA，使 circRNA 富集， 这样才能对 circRNA 进行准确分析。

1.细胞增殖

细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖，我们将为大家详细介绍3D 肿瘤球形成实验、MTT 增殖实验、克隆形成实验、细胞增殖检测实验方法。

2.细胞周期检测实验

细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程。

3.细胞凋亡

细胞凋亡是细胞死亡的一种类型，酸谈实验课程包含细胞凋亡检测（TUNEL 法）、AnexinV/7AAD 双染色检测细胞凋亡、线粒体膜电位检测等细胞凋亡实验。

4.血管新生

血管新生是在原有的毛细血管或者微静脉基础上，通过内皮细胞的增殖、分化和迁移，以芽生或非芽生的形式生成新生的血管。

RNA反转录合成cDNA，以cDNA为模板经过变性（让cDNA能够充分打开）、 退火（让引物结合到模板DNA上）和延伸（让DNA聚合酶（Taq酶）开始合成DNA， 让新的DNA链按照模板的碱基顺序延长下去）等过程扩增出很多的目的片段。

引物设计是PCR技术中至关重要的一环，使用不合适的PCR引物容易导致实验失败。

RNA抽提有很多种方法，其中TRIzol法是最流行的。TRIzol法很快速，且能抽提多种属总RNA，对少量的组织和细胞以及大量的组织和细胞都能有效分离，能抽提不同分子量大小的多种RNA，避免DNA和蛋白的污染，抽提出来的RNA适用于多种实验。

全称反转录·聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是将RNA 的反转录和cDNA 的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

蛋白免疫印迹（Western Blotting）是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上，然后用特异 性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。

使用IPP6软件分析单张免疫组化图像、分析多张免疫组化图像、批量分析免疫组化图像，包括校正图片、选定测量项目、选定测量范围、测量、输出数据等详细步骤。

Transwell 是一类有通透性的杯状的装置，放入培养板后，分为两室：Transwell 小室内称上室，盛装上层培养液；培养板内称下室，盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯膜（Polycarbonate Membrane）相隔。

细胞种在上室内，因聚碳酸酯膜有通透性，故可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

多读文献可以帮我们了解前沿研究动态和进展，找到立论依据，获得实验设计灵感。

当然，文献阅读也是讲究方法的，猫大老师为大家精选了多篇经典文献，通过还原文献场景，复现材料方法和结果部分写作套路，更有猫大亲测试剂种草，全方位帮你避坑~

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