奥密克戎毒株来袭，全球抗疫波澜再起。针对新变异毒株，国内外疫苗和药物研发企业也及时调整布局，对现有产品进行更新迭代或者启动新疫苗新药物的研发，新一轮研发竞赛已然在全球打响，加快进度已成迫切需求。
工欲善其事，必先利其器。近日，浙江迪福润丝生物科技有限公司研发团队成功开发了一种DIFF-Re-S-Omicron新型新冠假病毒技术，利用此技术可以快速地完成免疫中和抗体检测、模拟攻毒实验、疫苗/药物评价等临床前筛选和评估研究，可大大缩短新型疫苗和抗病毒药物研发周期。该技术只需在BSL-2级生物安全级别实验室中就可开展，还可广泛用于中和表位的筛选、抗原变异分子机制、机体免疫机制等科研领域。
技术亮点
- 可靠——高度模拟新冠病毒SARS-CoV-2感染细胞和动物，结果可靠且重复性高
- 安全——可在BSL-2级实验室安全操作，使更多科研人员受益
- 体外高通量——可对抗体或药物进行高通量筛选评价，缩短研发周期
- 活体示踪——可动态追踪病毒在小鼠体内复制情况，快速评价抗病毒药物/疫苗效果
- 降低成本——高通量筛选和活体成像技术可节约新药筛选评估研发成本，减少实验动物数量
关于DIFF-Re-S-Omicron新冠假病毒技术
DIFF-Re-S-Omicron新冠假病毒是迪福润丝研发团队利用水疱性口角炎（VSV）病毒载体系统构建的新型新冠假病毒。VSV与新冠病毒类似，是一种RNA囊膜病毒。研发人员利用VSV病毒载体系统，将G蛋白替换为新冠病毒S蛋白，并插入报告基因eGFP或Luciferase形成了新冠假病毒DIFF-Re-S-Omicron。研发团队的研究数据表明，DIFF-Re-S-Omicron能够成功进入目标细胞，感染hACE2小鼠。该假病毒安全性较高，可在BSL-2级实验室安全操作，而且其表面蛋白构象结构与天然病毒蛋白相似，可以模拟病毒入侵和感染细胞的机制，所以是一种用于代替天然病毒SARS-CoV-2用于疫苗研发、药物效果评价等的优质模型。在国外类似实验研究中，类似结构的假病毒已用于人用新冠疫苗的开发并已顺利通过临床I期安全性评估。DIFF新冠假病毒在抗原性质和免疫原性分析中具有很强的效力，可用来检测各种血清中和抗体。中和抗体检测对于临床前以及临床试验和大规模接种后疫苗效果的评估至关重要。利用天然病毒进行中和抗体检测成本高，危险性大，检测困难。DIFF新冠假病毒内含有GFP及Luciferase报告基因，方便检测。当使用DIFF新冠假病毒感染细胞或实验动物时，DIFF新冠假病毒会借助病毒囊膜表面的S蛋白与细胞膜上的ACE2蛋白相作用，进一步感染宿主细胞并复制，报告基因eGFP或Luciferase随即表达，其表达量与被感染的假病毒数量成正比，如果假病毒在细胞感染前与含有中和抗体的样品共同孵育，将阻止病毒进入细胞过程。故可以通过显微镜下绿色荧光蛋白强度或化学发光强度的结果来反映样品中和抗体的水平，绿色荧光蛋白强度或化学发光强度与中和抗体浓度成反比。报告基因eGFP为增强型绿色荧光蛋白，检测灵敏度高，荧光强度强、荧光性质稳定，便于后续观察与检测，适合检测少量样品。Luciferase是一种荧光素酶报告基因，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达，定量结果读取更直观，适用于的高通量筛选。图1 DIFF新冠假病毒(eGFP系统)免疫血清中和实验表1 疫苗效果评价-DIFF新冠假病毒（Luc系统）免疫血清中和抗体检测图注：DIFF疫苗免疫后，分别利用DIFF新冠假病毒eGFP和Luciferase系统检测免疫后不同天数中和抗体水平，动态监测中和抗体水平变化，评估疫苗的免疫持续期。用途2——模拟感染实验
DIFF新冠假病毒技术可用来模拟感染实验，与新冠病毒SARS-CoV-2感染动物模型结果相似，结果可靠且重复性高。表2 DIFF新冠假病毒与SARS-Cov-2病毒模拟攻毒实验对比图注：DIFF新冠假病毒感染后，空白小鼠3天后体重骤降，5～7天均死亡。SARS-CoV-2感染后，空白小鼠3天后体重骤降，5天均死亡。两种病毒感染小鼠后，疫苗免疫组小鼠均存活且体重变化平稳。结果表明，DIFF新冠假病毒与SARS-CoV-2感染小鼠后具有一致的表现，这表明该DIFF新冠假病毒感染模型是BSL-2条件下SARS-CoV-2感染的可替代模型。DIFF新冠假病毒的BSL-2级小鼠模型，是利用基因工程将示踪蛋白基因插入病毒基因组，再结合病毒反向遗传技术形成带标签的示踪病毒，从而实现实时追踪病毒在小鼠体内的复制、转移等特性，可以用来评价抗病毒药物或疫苗的有效性。该技术所用示踪病毒蛋白灵敏度高、成像速度快，可以直观的在动物活体上动态观察病毒去向，清晰的看到病毒复制效果，实现体外无法模拟的病毒真实感染情况，可大大减少实验动物用量，实现高通量药物筛选研究。同时在感染小鼠后，可以获取动物部分组织，对各组织器官内示踪病毒的组织分布进行有效评价。图注：空白对照组小鼠感染新冠毒株后，第1天开始小鼠鼻部即有较高信号值，7天后小鼠死亡免疫组小鼠接种滴鼻疫苗后第1～5天小鼠鼻部均无信号值，7天观察期无死亡。迪福润丝团队所开发的新型DIFF-Re-S-Omicron新冠假病毒技术、BSL-2级动物感染模型，具有多用途、高敏感性、高准确性、高重复性、高通量筛选及低成本等技术优势。目前公司已建成成熟的BSL-2级动物模型系统，具备开展一系列疫苗、抗体和药物等产品非临床安全性、免疫原性和有效性评价的综合技术能力，可提供稳定、可靠的研究数据。关于迪福润丝
浙江迪福润丝生物科技有限公司成立于2017年，致力于打造世界一流的重组病毒技术应用平台，专注于重大传染病基因工程疫苗、溶瘤病毒、病毒载体、mRNA递呈、病毒示踪、可视化核酸检测等技术的差异化创新。荣获国家高新技术企业、杭州市滨江区“瞪羚企业”、杭州市滨江区上市后备企业等称号，荣获第二十三届中国专利奖优秀奖，现拥有30余项国内外发明专利（含10余项PCT国际专利）。公司拥有BSL-2防护等级的专业实验室，是同时获得实验动物使用许可证和ABSL-2备案双重认证资质的负压型P2级开放式实验动物平台。
