B细胞耗竭治疗后，产生自身抗体的B细胞克隆再次出现的机制

公众号新闻

2023-01-17 23:01

推广专业学术交流、促进诊疗流程改善。

关键词：文献精读；重症肌无力；FcRn

导言：

“领读者”专辑立足重症肌无力（MG）诊疗以及新生儿Fc受体（FcRn）靶点前沿，筛选国内外最新发表的文献，邀请MG领域专家解读分享和点评要点，传播最新学术进展，提高国内相关专病医生对MG前沿学术进展以及FcRn靶点的理解。

原文丨 Kevin C. O’Connor（耶鲁大学医学院）

编译丨 谢琰臣博士（Healsan）/ Dr. Qi

点评丨 奚剑英博士（复旦大学附属上海华山医院）

编辑丨 Sophia Meng 博士（乔治华盛顿大学医院病理科）

重症肌无力（MG）是一种主要由自身抗体介导、并影响神经肌肉接头功能的自身免疫性疾病。

一小部分MG患者(<10%)具有针对肌肉特异性酪氨酸激酶(MuSK)的自身抗体。MuSK-MG患者对CD20介导的B细胞耗竭疗法(BCDT)反应良好，大多数可以达到完全稳定的缓解，但复发也很常见。

为了进一步了解复发的免疫机制，来自耶鲁大学医学院的Kevin C. O’Connor团队在Acta Neuropathologica Communications杂志上发表了一篇题为“Reemergence of pathogenic, autoantibody-producing B cell clones in myasthenia gravis following B cell depletion therapy”的文章。

在这项研究中，研究者证明了MuSK特异性B细胞克隆在反复几轮BCDT中持续存在，并在临床复发前重新出现，这与自身抗体滴度增加有关。

由此，这项工作加深了对MuSK-MG复发的机制理解，并给出了复发预测的极有价值的候选生物标志物。

研究设计及主要结果

研究人员首先开发了一种荧光标记的抗原来富集MuSK特异性B细胞，对来自9名MuSK-MG患者的12个不同样本的B细胞进行了MuSK特异性筛选，成功地从其中两名BCDT治疗后复发患者中分离出两个表达MuSK特异性IgG4亚类的浆母细胞，这些患者在BCDT诱导的缓解后正在经历复发。

🔺图1. 从循环B细胞中产生MUSK特异性人类单克隆抗体。

随后，他们生成了人重组MuSK mAb以验证结合特异性并表征其分子特性。

两种mAb（2E6和6C6）都是强MuSK结合剂，它们识别MuSK的Ig1样结构域，并在在体外实验中均可抑制乙酰胆碱受体(AChR)的簇集。

🔺图2. MUSK特异性单克隆抗体2E6和6C6的表位特异性和致病能力。

A图显示全长MuSK域的图解；B图显示测试不同MuSK蛋白突变与mAbs的结合；D图显示在C2C12小鼠肌管中的AChR聚类试验显示MuSK单抗的致病能力。

鉴于复发期间MuSK MG患者的浆母细胞频率增加，并且这些细胞可以表达致病性自身抗体，他们试图探索它们的基因表达谱是否显示出任何独特的特征，于是使用单细胞RNA-seq来研究复发时浆母细胞的表型，同时进行单细胞BCR测序以寻找与2E6和6C6相关的克隆，并探索表达IgG4的浆母细胞区室的MuSK特异性，结果如下图3所示。

简单来说，作者确定了11个不同的簇，注释为原始B细胞群、记忆B细胞群和浆母细胞群，浆母细胞由XBP1、IRF4、PRDM1的表达和高水平的体细胞超突变定义，其中一簇浆母细胞高水平表达与增殖有关的MKI67。

🔺图3. 复发时MuSK MG患者B细胞的单细胞RNA-seq特征。

最后，作者发现了2E6的三个独特克隆变体（CVA、CVB和CVC），它们在BCDT后持续存在，其中CVA和CVB是在MuSK自身抗体滴度增加期间发现的。

简单来说，携带这两种克隆变体的MuSK MG患者在第一个收集时间点出现复发、在之前前28个月接受了利妥昔单抗介导的BCDT。在79个月的过程中，患者又接受6次BCDT，并且在第一个克隆变体 2E6 CVA和2E6 CVB的鉴定之间接受了两个周期的BCDT，相隔31个月。

因此，2E6 在BCDT后持续存在并随着时间的推移重新出现。MuSK自身抗体滴度可能是检测BCDT诱导缓解后复发的生物标志物。

🔺图4. 持久性MuSK特异性B细胞克隆的特征。

主要结论

这项研究构建了两种新的MuSK mAb，它们与MuSK的Ig1样结构域结合并在体外表现出致病能力。这些MuSK特异性自身抗体是从BCDT后复发时收集的样本中分离出来的，来源于浆母细胞。

因此，MuSK-MG患者在复发前存在MuSK抗体滴度的升高及MuSK特异性B细胞克隆的出现，这两者都可以作为预测BCDT后复发的有价值的预后生物标志物。

解读的文献

【1】 Fichtner ML, Hoehn KB, Ford EE, Mane-Damas M, Oh S, Waters P, Payne AS, Smith ML, Watson CT, Losen M, Martinez-Martinez P, Nowak RJ, Kleinstein SH, O'Connor KC. Reemergence of pathogenic, autoantibody-producing B cell clones in myasthenia gravis following B cell depletion therapy. Acta Neuropathol Commun. 2022 Oct 28;10(1):154. doi: 10.1186/s40478-022-01454-0. PMID: 36307868; PMCID: PMC9617453.

点评

Kevin C. O’Connor教授团队多年来一直致力于MuSK抗体分泌细胞研究。B细胞删除疗法（BCDT）为这一研究提供了非常好的时机。

2017年，该团队发现经过利妥昔单抗（RTX）进行BCDT治疗后复发患者中的存在MuSK抗体升高，这些抗体主要由循环CD27^highCD38^high浆母细胞分泌。

2020年该团队又通过单细胞测序比较同一MuSK-MG患者BCDT治疗前及复发后B细胞克隆的差异，在复发期间的MuSK自身抗原特异性的B细胞克隆在BCDT治疗前即存在，这些持久性B细胞克隆主要由抗体分泌细胞（主要包括浆细胞和浆母细胞）和低水平表达CD20的记忆B细胞组成。

本研究是上述两项项研究的延续和深入，更多地探索这部分MuSK自身抗原特异性的B细胞克隆在BCDT治疗周期中的变化：MuSK特异性抗体由浆母细胞分泌；在一例79月内接受6次RTX的患者中发现，B细胞克隆及其变体2E6持续存在，并且其在外周的出现与MuSK抗体滴度升高及疾病复发密切相关。

作者推测可能的原因包括：RTX主要在血液循环中分布，无法删除组织残存的带有致病性克隆的B细胞；这些带有致病性克隆的B细胞低表达CD20，RTX治疗无法将其完全删除。

该系列的研究结果提示：对绝大多数MuSK-MG，RTX治疗是有效的。

自从RTX被用于MuSK-MG治疗以来，MuSK抗体阳性不再作为难治性MG的标志。对于接受RTX治疗的MuSK-MG病人来说，外周循环中监测MuSK自身抗原特异性B细胞或浆母细胞存在很多的技术难度，但MuSK抗体滴度的可作为MG复发的重要标志物，用于疾病的评估和随访。

同时，我们也可以发现RTX对于治疗MuSK-MG的复发也同样有效，一旦出现复发，仍可以周期性使用，症状亦可随外周MuSK特异性B细胞克隆的删除而得到快速缓解。

未来的对MuSK-MG的治疗需聚焦于如何更彻底地特异性清除这些MuSK特异性B细胞克隆。

参考文献：

1.Autoantibody-producing plasmablasts after B cell depletion identified in muscle-specific kinase myasthenia gravis. JCI Insight. 2017, 2(17):e94263

2.Single-cell repertoire tracing identifies rituximab-resistant B cells during myasthenia gravis relapses. JCI Insight. 2020, 5(14):e136471

点评作者简介：

本期编译：谢琰臣博士 / Dr. Qi；点评：奚剑英博士。

审核：ZMCNNP2022123000

“征战重症肌无力”与各位同仁一起，学习重症肌无力的研究进展，探索更优的诊疗策略。

欢迎同仁投稿及分享，请和李尊波医生联系。微信号：li-zun-bo

👇持续获取重症肌无力研究进展

微信扫码关注该文公众号作者

戳这里提交新闻线索和高质量文章给我们。

来源: qq

点击查看作者最近其他文章